细胞样本制备与保存标准操作指南

细胞样本的质量直接关系到实验结果的可靠性和可重复性。上海科博瑞生物将系统给您介绍细胞样本制备与保存的核心要点，为研究人员提供标准化操作参考，确保细胞样本在最佳状态下保存，维持其生物学特性和实验价值。
一、细胞样本制备关键步骤
 1. 制备前准备
- 实验设计明确：根据后续实验目的（如蛋白质组学、转录组学、细胞培养等）确定制备方案
- 试剂与耗材准备：所有接触细胞的试剂、耗材均需无菌、无核酸酶/蛋白酶污染
- 设备预冷：离心机转子、冻存管等提前预冷至适当温度
 2. 细胞收集与处理
- 细胞状态确认：确保细胞处于对数生长期，活细胞率>95%
- 温和处理：避免剧烈吹打，使用预冷的PBS或生理盐水清洗
- 适时处理：从培养箱取出后尽快处理，减少细胞应激反应
 3. 特殊处理要求
- 蛋白质分析样本：加入蛋白酶抑制剂混合物，避免反复冻融
- 核酸分析样本：使用无RNase/DNase耗材，加入RNA保护剂
- 代谢组学样本：快速淬灭代谢活动，使用预冷甲醇或专用淬灭液
 二、细胞保存方法与选择
 1. 短期保存（<24小时）
- 4℃保存：悬浮于完全培养基或缓冲液中
- 适用情况：当天进行的流式细胞术、活细胞成像等实验
- 注意事项：避免细菌污染，密封保存
 2. 中期保存（1周-1个月）
- -80℃保存：添加适宜冻存保护剂
- 推荐冻存液：
  - 细胞培养：含10%DMSO的胎牛血清
  - 蛋白分析：含蛋白酶抑制剂的裂解液
  - 核酸分析：RNA保护试剂（如TRIzol或专用保存液）
 3. 长期保存（>1个月）
- 液氮保存（-196℃）：细胞活性保持最佳方法
- 冻存程序：
  ```
  1. 程序降温：4℃ 30分钟 → -20℃ 2小时 → -80℃ 过夜
  2. 转移至液氮气相（-150℃）长期保存
  ```
- 冻存管选择：标注细胞信息、冻存日期、传代次数、操作者
 三、质量控制要点
 1. 细胞活性检测
- 冻存前后进行台盼蓝染色或MTT检测
- 复苏后细胞活性应>80%（理想情况>90%）
 2. 污染控制
- 定期检测支原体污染
- 细菌、真菌污染肉眼观察和镜检
- 细胞交叉污染STR鉴定
 3. 标记与记录
- 二维码或条形码管理系统
- 详细记录细胞来源、处理过程、保存位置
 四、常见问题解决方案
| 问题 | 可能原因 | 解决方案 |
| 复苏后细胞活性低 | 冻存过程降温过快 | 使用程序降温盒 |
| 蛋白质降解 | 蛋白酶抑制剂不足 | 添加多种蛋白酶抑制剂混合物 |
| RNA降解 | 操作过程中RNase污染 | 使用无RNase耗材，快速处理 |
| 支原体污染 | 原代细胞或操作污染 | 定期检测，使用支原体清除剂 |
 五、安全注意事项
1. 生物安全：根据细胞来源遵守相应生物安全等级要求
2. 液氮操作：佩戴防护面罩和手套，防止冻伤
3. 化学安全：DMSO等试剂妥善处理，避免直接接触皮肤
4. 废弃物处理：细胞废弃物按生物危险材料处理流程处理
 六、推荐保存方案汇总
| 应用方向 | 推荐保存方法 | 保存温度 | 预期保存时间 |
| 细胞复苏培养 | DMSO+血清冻存 | 液氮 | 10年以上 |
| Western Blot | RIPA裂解液 | -80℃ | 1年 |
| RNA提取 | TRIzol或RNA保护剂 | -80℃ | 6个月 |
| 代谢组学 | 80%甲醇淬灭 | -80℃ | 3个月 |
| 流式细胞术 | 含2%FBS的PBS | 4℃ | 24小时 |
 七、智能化管理系统
建议实验室建立细胞样本电子管理系统，包含：
- 样本位置实时追踪
- 冻存/取出记录自动更新
- 定期库存检查和提醒
- 样本信息快速检索

高质量的细胞样本是实验成功的基石。通过标准化制备流程和科学保存方法，可最大限度保持细胞样本的生物学完整性。随着单细胞分析、空间转录组学等新技术的发展，对细胞样本质量的要求将进一步提高。建立严格的样本管理规范，不仅是保证当前实验可靠性的需要，更是为未来研究保留宝贵生物资源的战略投资。